YFP抗体标签亲和纯化填料4FF [黄色荧光蛋白]，Anti-YFP Affinity Beads 4FF

指标

性能

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Anti-YFP Antibody

载量

>1mg YFP标签蛋白/ml 介质

粒径 (μm)

45-165

最大耐受压力

0.3 MPa, 3 bar

试剂耐受

Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100

储存缓冲液

0.02% NaN₃, 1×PBS

储存温度

2°C - 8°C

问题

原因分析

推荐解决方案

流穿中有目的蛋白

填料过载

减少上样体积或增加填料体积。

结合时间太短

延长样品和填料的结合时间。正常高浓度YFP（1mg/ml）需要30min才能达到饱和，样品浓度低时可延长至1小时以上或4度过夜。

标签未暴露

可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。

溶液中试剂不兼容

样品上样前进行透析。

洗脱组分中没有目的蛋白

目的蛋白不稳定

使用新配制的样品。

低温操作。

细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。

YFP空间构象

Anti-YFP Affinity Beads 4FF和YFP的结合，强烈依赖YFP的空间构像，影响YFP构象的缓冲条件会影响两者之间的结合。

YFP种类不同

绿色荧光蛋白有很多种，Anti-YFP Affinity Beads 4FF确定结合来自于管水母的野生型YFP以及GFP、EGFP等，不结合CFP和其他种属GFP。

样品中无标签融合蛋白

纯化前用荧光或WB检测是否有YFP标签融合蛋白。

目的蛋白表达量太低

优化蛋白表达量。

增加上样量。

减少NaCl浓度。

背景太杂

非特异性吸附

减少上样量，增加盐浓度。

洗杂不充分

保证充分悬浮，填料需要完全吹打散开，洗涤残留液需要尽量去除干净，增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min。

增加洗杂液中盐离子浓度，使用超级核酸酶去除核酸影响。

洗脱后污染

填料用酸洗脱后，将洗脱液转移至新管中，再进行检测，可有效降低背景。