sevenspikes.themes.common.filters
sevenspikes.themes.common.closemenu

RFP抗体标签亲和纯化填料 [红色荧光蛋白],Anti-RFP Affinity Beads 4FF

红色荧光蛋白免疫亲和专用填料,红色荧光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)是从海葵中分离得到的一种分子标记,常用于研究蛋白质的定位、报告基因表达和蛋白-蛋白质相互作用。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA072
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$985.88

1. 产品介绍

红色荧光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)是从海葵中分离得到的一种分子标记,常用于研究蛋白质的定位、报告基因表达和蛋白-蛋白质相互作用。Anti-RFP Affinity Beads 4FF 是一种偶联了抗RFP抗体的琼脂糖填料,可以用于天然RFP、RFP突变体及其融合蛋白的免疫沉淀、免疫共沉淀、亲和层析等实验。本产品具有以下特点:1)使用的抗体和RFP之间具有极高的亲和力, 可以高效捕获裂解上清中的RFP标签蛋白;2)免疫沉淀后,SDS-PAGE检测, 背景更干净,更有利于鉴定蛋白相互作用。3)琼脂糖基材具有非特异性吸附低,兼容性好的特点,每毫升载量大于1mg(最高可达到5mg/ml RFP结合载量),可以用于RFP融合蛋白的大量纯化。此外,我们还提供磁性琼脂糖基材的Anti-RFP Affinity Magarose Beads、高聚物基材的Anti-RFP Affinity Magpoly Beads,可以方便的用于磁性分离。

表1. Anti-RFP Affinity Beads 4FF产品性能

指标

性能

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Anti-RFP Antibody

载量

>1mg RFP标签蛋白/ml 介质

粒径 (μm)

45-165

最大流速

0.3 MPa, 3 bar

试剂耐受(注意:不影响单链抗体的活性,但是可能影响RFP蛋白的构象)

Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100

储存缓冲液

 

0.02%叠氮化钠,1XPBS

储存温度

2°C - 8°C

 

2.问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

洗脱组分中没有目的蛋白

种属不同

并不是每一种RFP蛋白都可以结合Anti-RFP Affinity Beads,本产品确定结合Tag-RFP、turbo-RFP、DsRed、mRFP 、 mCherry 、 mOrange、mPlum、mRuby、mKate2、mRFPruby。

样品中无标签融合蛋白

纯化前Western检测是否有RFP标签融合蛋白

空间构象改变

Anti-RFP Affinity Beads对于RFP 的结合,强烈依赖于RFP的空间构象,影响RFP构象的缓冲条件会影响Beads和RFP之间的结合。

副孔样品差异较大

细胞转染和样品制备差异

通常样品制备以后,需要进行蛋白浓度定量,各正副孔上样量需要一致。

填料损失

填料在洗涤过程中有损失,琼脂糖填料离心后,每次移液需要注意不要吸走填料。最后一次洗涤以后,如果有液体残留,不同样品之间需要留有相同体积的残液。降低操作误差。

背景高

洗涤不充分,洗杂液残留

填料需要轻轻吹打分散开。可以考虑用SDS-PAGE的上样针,插入Beads中,尽量移走残液。最后一次洗杂更换新离心管。

核酸影响

样品裂解时候,如果核酸过多,可能造成大量非特异性吸附,此时推荐使用本公司的超级核酸酶促进样品处理。同时也要注意,高速离心以后,转移样品不要将沉淀的细胞碎片转移。

结合效率低

孵育时间过短

在高浓度的RFP蛋白溶液中(1mg/ml),至少需要30分钟,填料才可以达到饱和。样品浓度低时建议延长时间至1小时以上或4℃过夜。

 

填料粒径大,空间位阻影响结合

选择粒径更小的磁珠Anti-RFP Affinity Magpoly Beads(1μm),磁珠和RFP的结合速度可以大大提高,洗涤的时间也可以缩短。

 

3.订购信息及相关产品

名称

货号

规格

Anti-DYKDDDDK Affinity Beads

SA042001

1ml

SA042005

5ml

Anti-HA Affinity Beads

SA068001

1ml

SA068005

5ml

Anti-c-Myc Affinity Beads

SA065001

1ml

SA065005

5ml

Anti-GFP Affinity Beads 4FF

SA070001

1ml

SA070005

5ml

Anti-YFP Affinity Beads 4FF

SA075001

1ml

SA075005

5ml

Anti-RFP Affinity Beads 4FF

SA072001

1ml

SA072005

5ml

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.2-8°C冷藏
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16