RFP抗体标签亲和纯化填料4FF [红色荧光蛋白]，Anti-RFP Affinity Beads 4FF

指标

性能

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Anti-RFP Antibody

载量

>1mg RFP标签蛋白/ml 介质

粒径 (μm)

45-165

最大流速

0.3 MPa, 3 bar

试剂耐受(注意：不影响单链抗体的活性，但是可能影响RFP蛋白的构象)

Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100

储存缓冲液

0.02%叠氮化钠，1XPBS

储存温度

2°C - 8°C

问题

原因分析

推荐解决方案

洗脱组分中没有目的蛋白

种属不同

并不是每一种RFP蛋白都可以结合Anti-RFP Affinity Beads，本产品确定结合Tag-RFP、turbo-RFP、DsRed、mRFP 、 mCherry 、 mOrange、mPlum、mRuby、mKate2、mRFPruby。

样品中无标签融合蛋白

纯化前Western检测是否有RFP标签融合蛋白

空间构象改变

Anti-RFP Affinity Beads对于RFP 的结合，强烈依赖于RFP的空间构象，影响RFP构象的缓冲条件会影响Beads和RFP之间的结合。

副孔样品差异较大

细胞转染和样品制备差异

通常样品制备以后，需要进行蛋白浓度定量，各正副孔上样量需要一致。

填料损失

填料在洗涤过程中有损失，琼脂糖填料离心后，每次移液需要注意不要吸走填料。最后一次洗涤以后，如果有液体残留，不同样品之间需要留有相同体积的残液。降低操作误差。

背景高

洗涤不充分，洗杂液残留

填料需要轻轻吹打分散开。可以考虑用SDS-PAGE的上样针，插入Beads中，尽量移走残液。最后一次洗杂更换新离心管。

核酸影响

样品裂解时候，如果核酸过多，可能造成大量非特异性吸附，此时推荐使用本公司的超级核酸酶促进样品处理。同时也要注意，高速离心以后，转移样品不要将沉淀的细胞碎片转移。

结合效率低

孵育时间过短

在高浓度的RFP蛋白溶液中（1mg/ml）,至少需要30分钟，填料才可以达到饱和。样品浓度低时建议延长时间至1小时以上或4℃过夜。

填料粒径大，空间位阻影响结合

选择粒径更小的磁珠Anti-RFP Affinity Magpoly Beads（1μm），磁珠和RFP的结合速度可以大大提高，洗涤的时间也可以缩短。