1.产品介绍
Dextrin Beads 6FF是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,具体性能见表1。MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。Dextrin Beads 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。
表1. Dextrin Beads 6FF产品性能
性能
指标
基质
高度交联的6%琼脂糖微球
配体
糊精
载量(/ml 介质)
>10 mg MBP蛋白(80 kDa)
粒径 (μm)
45-165
最大流速
0.3 MPa, 3 bar
pH 稳定范围
3-12
储存缓冲液
含20% 乙醇的1XPBS
储存温度
2°C -8°C
2. 问题及解决方案
问题
原因分析
推荐解决方案
柱子反压过高
填料被堵塞
按照第3部分进行树脂清洗。
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜 (0.22或 0.45μm) 过滤,或者离心去除。
目的蛋白没有吸附
目的蛋白未表达
确保目的蛋白表达
样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂
样品透析或用平衡液稀释
细胞产生大量的淀粉酶影响结合力
培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达
融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲,影响了目的蛋白的结合力
更换载体
柱子结合时间太短
将样品与Dextrin Beads 6FF振荡孵育4度2小时或更长时间
洗脱样品较杂
目的蛋白降解
加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等
平衡/洗杂不充分
增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂,如树脂太脏按照第3部分进行树脂清洗。