GFP抗体标签亲和纯化填料4FF [绿色荧光蛋白]，Anti-GFP Affinity Beads 4FF

指标

性能

基质

高度交联的4%琼脂糖微球

配体

Anti-GFP Antibody

载量

>1mg GFP标签蛋白/ml 介质

粒径 (μm)

45-165

最大流速

0.3 MPa, 3 bar

试剂耐受

Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100

储存缓冲液

0.02%叠氮化钠，1XPBS

储存温度

2°C - 8°C

问题

原因分析

推荐解决方案

流穿中有目的蛋白

填料过载

减少上样体积或增加填料体积。

结合时间太短

延长样品和填料的结合时间。

标签未暴露

可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。

溶液中试剂不兼容

样品上样前进行透析。

洗脱组分中没有目的蛋白

目的蛋白不稳定

使用新配制的样品。

低温操作。

细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。

样品中无标签融合蛋白

纯化前Western检测是否有GFP标签融合蛋白

目的蛋白表达量太低

优化蛋白表达量。

增加上样量。

减少NaCl浓度。

背景太杂

非特异性吸附

减少上样量，增加盐浓度。

洗杂不充分

增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min。

增加洗杂液中盐离子浓度。