1. 产品介绍
GFP(绿色荧光蛋白)或其突变体EGFP(增强型绿色荧光蛋白)被广泛应用于检测基因表达效率以及目的蛋白的表达和分布。GFP作为标签蛋白,其融合目的蛋白自发荧光,不需要目的基因的抗体或杂交就能知道目的基因在细胞中的定位,其他物质干扰小。Anti-GFP Affinity Beads 4FF可以检测和纯化GFP、EGFP及其融合表达蛋白,不结合BFP标签蛋白。
指标
性能
基质
高度交联的4%琼脂糖微球
配体
Anti-GFP Antibody
载量
>1mg GFP标签蛋白/ml 介质
粒径 (μm)
45-165
最大流速
0.3 MPa, 3 bar
试剂耐受
Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100
储存缓冲液
0.02%叠氮化钠,1XPBS
储存温度
2°C - 8°C
问题
原因分析
推荐解决方案
流穿中有目的蛋白
填料过载
减少上样体积或增加填料体积。
结合时间太短
延长样品和填料的结合时间。
标签未暴露
可以加入低浓度的变性剂,上样前透析。
溶液中试剂不兼容
样品上样前进行透析。
洗脱组分中没有目的蛋白
目的蛋白不稳定
使用新配制的样品。
低温操作。
细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
样品中无标签融合蛋白
纯化前Western检测是否有GFP标签融合蛋白
目的蛋白表达量太低
优化蛋白表达量。
增加上样量。
减少NaCl浓度。
背景太杂
非特异性吸附
减少上样量,增加盐浓度。
洗杂不充分
增加洗杂次数,每次清洗孵育5-10min。
增加洗杂液中盐离子浓度。