工作溶液: D (–)-荧光素溶液的制备
为了尽量减少对不稳定化合物的处理,制备所需近似浓度的 D (–)-荧光素溶液,然后根据 327 nm 处的吸光度将其调整至准确浓度。D (–)-荧光素在 327 nm 处的吸收率为 18.2 mmol
-1 x lx cm
-1 )。
例如,为制备 700 MD()-荧光素溶液:
- 取 1.5 mg D()-荧光素,加入 5 mL 70 mM Tris-乙酸盐 (pH 7.75) 中 [理论浓度 = 1.07 mM]
- 用缓冲液将储备液稀释 20 倍。
- 读取 327 nm 处的吸光度。
向储备液中加入缓冲液- 使 20 倍稀释得到 0.637 的 A327(20 倍稀释浓度 = 35μM;贮备液浓度 = 700μM)