1. 产品介绍
HA标签是人流感血凝素的第98-106氨基酸序列YPYDVPDYA,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端,因此常被用于重组蛋白的融合表达。Anti-HA Affinity Beads以4%琼脂糖凝胶为基质,杂蛋白非特异性结合少,可用于HA标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀(IP)。
指标
性能
基质
4%琼脂糖微球
配体
Anti-HA鼠单克隆抗体
配体密度
>1mg HA标签蛋白/ml 介质
粒径 (μm)
45-165
最大耐受压力
0.1MPa, 1 bar
储存缓冲液
1XPBS ,0.02%叠氮化钠
储存温度
2°C - 8°C
问题
原因分析
推荐解决方案
流穿中有目的蛋白
填料过载
减少上样体积或增加填料体积。
结合时间太短
延长样品和填料的结合时间。
标签未暴露
可以加入低浓度的变性剂,上样前透析。
溶液中试剂不兼容
样品上样前进行透析。
洗脱组分中没有目的蛋白
目的蛋白不稳定
使用新配制的样品。
低温操作。
细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
样品中无标签融合蛋白
纯化前Western检测是否有HA标签融合蛋白
目的蛋白表达量太低
优化蛋白表达量。
增加上样量。
减少NaCl浓度。
背景太杂
非特异性吸附
减少上样量
洗杂不充分
增加洗杂次数,每次清洗孵育5-10min。
增加洗杂液中盐离子浓度。