Anti-Flag抗体标签亲和纯化填料，Anti-DYKDDDDK Affinity Beads

指标

性能

基质

4%琼脂糖微球

配体

Anti-flag鼠单克隆抗体

载量

>1mgDYKDDDDK标签蛋白/ml 介质

粒径 (μm)

45-165

最大流速

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

0.02%叠氮化钠，1XPBS

储存温度

2°C - 8°C

试剂名称

最大耐受浓度

备注

β-巯基乙醇

10mM

纯化过程中应避免使用，如果在IP中使用，填料不能回收重复利用。

DTT

80mM

SDS

--

EDTA

5mM

过高的EDTA会降低蛋白回收率。

Tween-20

5%

过高浓度会影响标签蛋白结合效率。

Triton X-100

5%

NP-40

4%

盐酸胍

0.3M

过高浓度会使抗体变性。

尿素

1.5M

甘油

20%

过高浓度会影响标签蛋白结合。

氯化钠

1M

减少非特异性吸附

问题

原因分析

推荐解决方案

流穿中有目的蛋白

填料过载

减少上样体积或增加填料体积。

结合时间太短

延长样品和填料的结合时间。

标签未暴露

可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。

溶液中试剂不兼容

样品上样前进行透析。

洗脱组分中没有目的蛋白

目的蛋白不稳定

使用新配制的样品。

低温操作。

细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。

样品中无标签融合蛋白

纯化前Western检测是否有flag标签融合蛋白

目的蛋白表达量太低

优化蛋白表达量。

增加上样量。

减少NaCl浓度。

背景太杂

非特异性吸附

减少上样量

洗杂不充分

增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min。

增加洗杂液中盐离子浓度。