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镍金属螯合亲和填料 [His标签蛋白],Ni IDA Beads

Ni IDA Beads可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。用于His标签蛋白的纯化,是一款性价比较高的产品,如果目的蛋白是可溶性表达,推荐使用该款产品。
制造商品牌: BSZH Scientific
货号(SKU): SA003
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
€200.80

1. 产品介绍

Ni IDA Beads可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。它是以4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸(IDA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成比较稳定的平面四边形结构,从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位,达到结合目的蛋白的效果(产品化学结构见图1所示)。但是,这样的结构比较容易受到其他小分子的进攻,镍离子易被还原或者被螯合,从而破坏其化学结构,无法结合目的蛋白。

Ni IDA Beads具有载量高,性价比高的优点。具体性能见表1。

表1. Ni IDA Beads产品性能

项目

性能

基质

4%琼脂糖凝胶

载量(/mL基质)

>40mg 6XHis-tagged protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

 

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照第3部分对填料进行在位清洗。

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。

样品太粘稠

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

缓冲液太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值,或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到目的蛋白。

蛋白降解

在4°C下进行纯化操作。 

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂操作不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料颜色变浅或变成白色

镍离子脱落或被剥离

按照第4部分填料再生中的建议重新挂镍离子。

填料呈现褐色

缓冲液中含有DTT

对Ni IDA Beads,不能耐受DTT,建议换用Ni NTA Beads或者Ni NTA Beads 6FF。

对于Ni NTA Beads或者Ni NTA Beads FF,建议降低DTT的浓度至2mM以下,或者改用巯基乙醇。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

3. 订购信息及相关产品

名称

货号

规格

Ni IDA Beads

SA003025

25mL

SA003100

100ml

SA003250

250ml

SA003500

500ml

SA003C

1L

 

Ni IDA Beads 6FF

SA052025

25mL

SA052100

100ml

SA052250

250ml

SA052500

500ml

SA052C

1L

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16