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镍金属螯合亲和填料 [His标签蛋白],Ni NTA Beads 6FF

Ni NTA Beads 6FF可用于可溶蛋白和包涵体的纯化,因其耐压的骨架,可以应用于大规模蛋白纯化,更容易放大规模。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA005
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$253.00

1. 产品介绍

Ni NTA Beads 6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,配体与Ni NTA Beads 相同(产品结构见图1所示),具体性能见表1。Ni NTA Beads 6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件(见表2)外,因其耐压的基质,可以耐受最高0.3 MPa的压力,更稳定,因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化,可以在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。

表1. Ni NTA Beads 6FF产品性能

 

Ni NTA Beads 6FF

基质

高度交联的6%琼脂糖凝胶

载量(/mL基质)

>40mg 6XHis-tagged

protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

表2. Ni NTA Beads 6FF试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% Triton™ X-100 (nonionic)

2% Tween™ 20 (nonionic)

2% NP-40 (nonionic)

2% Cholate (anionic)

1% CHAPS (zwitterionic)

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

缓冲液 

50 mM sodium phosphate, pH 7.4

100 mM Tris-HCl, pH 7.4

100 mM Tris-acetate, pH 7.4

100 mM HEPES, pH 7.4

100 mM MOPS, pH 7.4

100 mM sodium acetate, pH 4

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

样品太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值,或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到目的蛋白。 

蛋白降解

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。在4°C下进行纯化操作。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料呈现褐色

缓冲液中含有DTT等还原剂

参考表2,适当降低还原剂DTT的浓度,或者改用巯基乙醇。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

3.订购信息及相关产品

 

名称

货号

规格

Ni NTA Beads

SA004010

10mL

SA004050

50mL

SA004100

100mL

SA004500

100mL

SA004C

1L

HisPur Ni NTA kit

SA004K

3次

Ni NTA Beads 6FF

SA005010

10mL

SA005025

25mL

SA005100

100mL

SA005500

500mL

SA005C

1L

HisCap 6FF

SA005C11

1X1mL

SA005C51

5x1mL

SA005C15

1X5mL

SA005C55

5X5mL

SA005CS

3X1mL+1X5mL

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16