镍金属螯合NTA亲和纯化填料 [His标签蛋白]，Ni NTA Beads

图片 镍金属螯合NTA亲和纯化填料 [His标签蛋白]，Ni NTA Beads
用于His标签蛋白的纯化，其配体为稳定的四配位结构，该产品可以耐受比较苛刻的化学试剂，因此，该产品具有较广泛的应用范围，可以针对包涵体和可溶蛋白的纯化。
制造商品牌: BSZH
货号（SKU）: SA004
签订合同 √ 正规发票 √ 技术支持 √ 质量保障 √ 全程可追溯 √
¥876.00

1. 产品介绍

Ni NTA Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸（NTA），螯合镍离子（Ni2+）后，可以形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构很有效的保护了镍离子免受小分子的进攻（产品结构见图1所示，三种产品结构的区别），更加稳定，具体性能见表1。Ni NTA Beads可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件（见表2），适用性更广，配体更稳定，选择性更高。

表1. Ni NTA Beads产品性能

项目

性能

基质

4%琼脂糖凝胶

载量（/mL基质）

>40mg 6XHis-tagged protein

微球粒径（μm）

45–165

最大压力

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

含20%乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

表2. Ni NTA Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% Triton™ X-100 (nonionic)

2% Tween™ 20 (nonionic)

2% NP-40 (nonionic)

2% cholate (anionic)

1% CHAPS (zwitterionic)

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

缓冲液 

50 mM sodium phosphate, pH 7.4

100 mM Tris-HCl, pH 7.4

100 mM Tris-acetate, pH 7.4

100 mM HEPES, pH 7.4

100 mM MOPS, pH 7.4

100 mM sodium acetate, pH 4

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22 或0.45μm）过滤，或者离心去除。

样品中含有高浓度的核酸，加长破碎时间直至粘度降低，或者添加DNase I （终浓度5 μg/ml），Mg2+ （终浓度 1 mM），冰上孵育10-15分钟。

样品太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体，没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH，或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值，或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到目的蛋白。

蛋白降解

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。

在4°C下进行纯化操作。

洗脱组分不纯（含有多种蛋白）

洗杂不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值，或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段（如离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。

填料呈现褐色

缓冲液中含有DTT等还原剂

参考表2，适当降低还原剂DTT的浓度，或者改用巯基乙醇。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂，如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 20 | 欧洲Eur. ≥ 16 | 東京Tokyo ≥ 5 | 香港与北京 ≥ 20
商品分类
最近浏览商品
热门标签
更多