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镍金属螯合亲和填料 [His标签蛋白],Ni IDA Beads 6FF

Ni IDA Beads 6FF可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。用于His标签蛋白的纯化,是一款性价比较高的产品,如果目的蛋白是可溶性表达,推荐使用该款产品。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA052
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$367.45

1. 产品介绍

 

Ni IDA Beads 6FF可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。它是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸(IDA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成比较稳定的平面四边形结构,从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位,达到结合目的蛋白的效果(产品化学结构见图1所示)。

Ni IDA Beads 6FF具有载量高,性价比高的优点。具体性能见表1。

表1. Ni IDA Beads 6FF产品性能

 

Ni IDA Beads 6FF

基质

高度交联的6%琼脂糖凝胶

载量(/mL基质)

>40mg 6XHis-tagged protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

样品太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值,或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到目的蛋白。 

蛋白降解

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。在4°C下进行纯化操作。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料呈现褐色

缓冲液中含有DTT等还原剂

样品透析或更换耐受性更强的填料。如Ni NTA Beads或Ni Smart Beads。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

3.订购信息及相关产品

 

名称

货号

规格

Ni IDA Beads

SA003025

25mL

SA003100

100ml

SA003250

250ml

SA003500

500ml

SA003C

1L

 

Ni IDA Beads 6FF

SA052025

25mL

SA052100

100ml

SA052250

250ml

SA052500

500ml

SA052C

1L

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16