sevenspikes.themes.common.filters
sevenspikes.themes.common.closemenu

镍金属螯合亲和填料试剂盒 [His标签蛋白],HisPur Ni NTA Kit

用于His标签蛋白的纯化,其配体为稳定的四配位结构,该产品可以耐受比较苛刻的化学试剂,因此,该产品具有较广泛的应用范围,可以针对包涵体和可溶蛋白的纯化。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA004K
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$512.02

1. 产品介绍

Ni NTA Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸(NTA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构保护了镍离子免受小分子的进攻(产品结构见图1所示,三种产品结构示意图),更加稳定,具体性能见表1。Ni NTA Beads可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件(见表2),适用性更广,配体更稳定,选择性更高。

HisPur Ni NTA kit提供3ml Ni NTA Beads重力预装柱和组氨酸标签蛋白纯化所需的缓冲液,方便客户使用,操作简单,纯化效率高。试剂盒详细组分见表3。

 表1. Ni NTA Beads产品性能

项目

性能

基质

4%琼脂糖凝胶

载量(/mL基质)

>40mg 6XHis-tagged protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

 

表2. Ni NTA Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% Triton™ X-100 (nonionic)

2% Tween™ 20 (nonionic)

2% NP-40 (nonionic)

2% cholate (anionic)

1% CHAPS (zwitterionic)

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

缓冲液 

50 mM sodium phosphate, pH 7.4

100 mM Tris-HCl, pH 7.4

100 mM Tris-acetate, pH 7.4

100 mM HEPES, pH 7.4

100 mM MOPS, pH 7.4

100 mM sodium acetate, pH 4

表3. HisPur Ni NTA Kit试剂盒组分

组分名称

货号

规格

数量

HisPur Ni NTA Column

SA004K-1

3mL

1

Lysis Buffer

SA004K-2

100mL

2

Elution Buffer

SA004K-3

100mL

1

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子流速慢

填料被堵塞

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.2或 0.45 μm)过滤,或者离心去除。

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

样品太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件,使用包涵体纯化缓冲体系。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值,或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。使用

10-100mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到目的蛋白。 

蛋白降解

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。

在4°C下进行纯化操作。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料呈现褐色

缓冲液中含有DTT等还原剂

参考表2,适当降低还原剂DTT的浓度,或者改用巯基乙醇。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

3. 订购信息及相关产品

名称

货号

规格

Ni NTA Beads

SA004010

10mL

SA004050

50mL

SA004100

100mL

SA004500

100mL

SA004C

1L

HisPur Ni NTA kit

SA004K

3次

Ni NTA Beads 6FF

SA005010

10mL

SA005025

25mL

SA005100

100mL

SA005500

500mL

SA005C

1L

HisCap 6FF

SA005C11

1X1mL

SA005C51

5x1mL

SA005C15

1X5mL

SA005C55

5X5mL

SA005CS

3X1mL+1X5mL

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16