镍金属螯合亲和纯化填料试剂盒 [His标签蛋白]，HisPur Ni NTA Kit

用于His标签蛋白的纯化，其配体为稳定的四配位结构，该产品可以耐受比较苛刻的化学试剂，因此，该产品具有较广泛的应用范围，可以针对包涵体和可溶蛋白的纯化。

制造商品牌: BSZH

货号（SKU）: SA004K

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1Kit [3次]

1. 产品介绍

Ni NTA Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸（NTA），螯合镍离子（Ni²⁺）后，可以形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构保护了镍离子免受小分子的进攻（产品结构见图1所示，三种产品结构示意图），更加稳定，具体性能见表1。Ni NTA Beads可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件（见表2），适用性更广，配体更稳定，选择性更高。

HisPur Ni NTA kit提供3ml Ni NTA Beads重力预装柱和组氨酸标签蛋白纯化所需的缓冲液，方便客户使用，操作简单，纯化效率高。试剂盒详细组分见表3。

表1. Ni NTA Beads产品性能

项目	性能
基质	4%琼脂糖凝胶
载量（/mL基质）	>40mg 6XHis-tagged protein
微球粒径（μm）	45–165
最大压力	0.1 MPa, 1 bar
储存缓冲液	含20% 乙醇的1XPBS
储存温度	4°C-30°C

表2. Ni NTA Beads试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5 mM DTE 1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione
变性剂	8 M urea 6 M Gua-HCl
去污剂	2% Triton™ X-100 (nonionic) 2% Tween™ 20 (nonionic) 2% NP-40 (nonionic) 2% cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic)
其他类	500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na₂SO₄ 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate
缓冲液	50 mM sodium phosphate, pH 7.4 100 mM Tris-HCl, pH 7.4 100 mM Tris-acetate, pH 7.4 100 mM HEPES, pH 7.4 100 mM MOPS, pH 7.4 100 mM sodium acetate, pH 4

表3. HisPur Ni NTA Kit试剂盒组分

组分名称	货号	规格	数量
HisPur Ni NTA Column	SA004K-1	3mL	1
Lysis Buffer	SA004K-2	100mL	2
Elution Buffer	SA004K-3	100mL	1

2. 问题及解决方案

问题	原因分析	推荐解决方案
柱子流速慢	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.2或 0.45 μm）过滤，或者离心去除。
	填料被堵塞	样品中含有高浓度的核酸，加长破碎时间直至粘度降低，或者添加DNase I （终浓度5 μg/ml），Mg²⁺ （终浓度 1 mM），冰上孵育10-15分钟。
	样品太粘稠	有机溶剂或者蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中没有目的蛋白	蛋白可能是包涵体，没有在上清中	可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。
	表达量太低	优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系。
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤被洗下来了	提高wash Buffer的pH，或者降低咪唑浓度。
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer的pH值，或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。使用
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	10-100mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到目的蛋白。
	蛋白降解	菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。
	蛋白降解	在4°C下进行纯化操作。
洗脱组分不纯（含有多种蛋白）	洗杂不彻底	增加Wash Buffer体积。
洗脱组分不纯（含有多种蛋白）	样品中含有其他的组氨酸标签蛋白	通过调节pH值，或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段（如离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
填料呈现褐色	缓冲液中含有DTT等还原剂	参考表2，适当降低还原剂DTT的浓度，或者改用巯基乙醇。
上样过程中蛋白发生沉淀	操作温度太低	室温下进行上样。
上样过程中蛋白发生沉淀	蛋白发生聚集	在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂，如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

商品规格

属性名称	属性值
储存温度 Storage temp.	常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √	美国St. Louis ≥ 20 \| 欧洲Eur. ≥ 16 \| 東京Tokyo ≥ 5 \| 香港与北京 ≥ 20

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