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铜金属螯合亲和填料预装柱 [His标签蛋白],Cu IDA Beads [重力柱]

>20mg 6XHis-tagged protein,可用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA041GC
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$91.36

1. 产品介绍

Cu IDA Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸(IDA),螯合铜离子(Cu2+)。可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。具体性能见表1。

表1. Cu IDA Beads产品性能

项目

性能

基质

4%琼脂糖凝胶

载量(/mL基质)

>20mg 6XHis-tagged protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

 

2. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照第3部分对填料进行在位清洗。

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。

样品太粘稠

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

缓冲液太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高wash Buffer的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低Elution Buffer的pH值,或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离金属离子,同时得到目的蛋白。

蛋白降解

在4°C下进行纯化操作。 

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂操作不彻底

增加Wash Buffer体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料颜色变浅或变成白色

金属离子脱落或被剥离

建议重新挂铜离子。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16