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钴金属螯合亲和填料 [His标签蛋白],Co NTA Beads

用于His标签蛋白的纯化,其配体为稳定的四配位结构,该产品可以耐受比较苛刻的化学试剂,因此,该产品具有较广泛的应用范围,可以针对包涵体和可溶蛋白的纯化。
制造商品牌: BSZH 科学公司
货号(SKU): SA037
增值税发票 √ 免费送货 √ 订货电话:010-68689484
$383.51

1. 产品介绍

Co NTA Beads可以从原核和真核表达系统中一步纯化His标签蛋白。该产品是以4%琼脂糖凝胶为基质,配体以四配位键螯合钴。Co NTA Beads相比Ni NTA Beads对His标签蛋白具有更高的选择性。具体性能见表1。

表1. Co NTA Beads的产品性能

项目

性能

基质

4%琼脂糖凝胶

螯合离子

Co2+

载量(/mL基质)

>20mg 6╳His-tagged protein

微球粒径(μm)

45–165

最大压力

0.1 MPa, 1 bar

储存缓冲液

含20% 乙醇的1XPBS

储存温度

4°C-30°C

Co NTA Beads可以耐受一定范围的变性剂和其他的添加剂,如表2。

表2. Co NTA Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

10 mM β-mercaptoethanol1

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

<1% Triton™ X-100

1% NP-40

1% CHAPS ,SDS, sarcosyl

其他类

≤500 mM imidazole at pH7.0 to 8.0 for elution

30% ethanol2

20% glycerol

500 mM KCl

1.0 M NaCl

20mM MES

50 mM Tris3

50 mM HEPES

50 mM MOPS

Note: Co NTA Beads 6FF立即用平衡液平衡,否则介质会变色。不要将介质保存在含有β-Mercaptoethanol的缓冲液中。

2 过高浓度的咪唑有可能会降低蛋白回收率。

3乙醇有可能造成蛋白沉淀,降低蛋白回收率和堵柱子。

Tris与金属离子微弱结合造成载量降低。

避免使用下列试剂:DTT (dithiothreitol), DTE (dithioerythritol) and TCEP (TRIS (2-carboxyethyl) phosphine).会降低介质的蛋白载量。

EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 、 EGTA (ethylene Glycolbis ([β-amino-ethyl ether])会将钴离子从介质上剥落。

2. 问题及解决方案

 

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。

样品中含有高浓度的核酸,加长破碎时间直至粘度降低,或者添加DNase I (终浓度5 μg/ml),Mg2+ (终浓度 1 mM),冰上孵育10-15分钟。

样品太粘稠

有机溶剂或者蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中没有目的蛋白

蛋白可能是包涵体,没有在上清中

可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

表达量太低

优化表达条件。

目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤被洗下来了

提高洗杂液的pH,或者降低咪唑浓度。

目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来

降低洗脱液的pH值,或者增加洗脱液中咪唑浓度。

使用10-100mM EDTA溶液剥离钴离子,同时得到目的蛋白。 

蛋白降解

菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。在4°C下进行纯化操作。

洗脱组分不纯(含有多种蛋白)

洗杂不彻底

增加洗杂液体积。

样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

通过调节pH值,或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段(如离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。

填料颜色变浅

Co离子被剥落

参考part3重新螯合钴离子。

上样过程中蛋白发生沉淀

操作温度太低

室温下进行上样。

蛋白发生聚集

在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂,如0.1%的Triton X-100 或者Tween-20。

 

3. 订购信息及相关产品

 

名称

货号

规格

Co NTA Beads

SA037010

10mL

SA037050

50mL

SA037100

100mL

SA037C

1L

Co NTA Beads 6FF

SA038010

10mL

SA038025

25mL

SA038050

50mL

SA038100

100mL

SA038C

1L

HisCap Co 6FF

SA038C11

1X1mL

SA038C51

5x1mL

SA038C15

1X5mL

SA038C55

5X5mL

SA038CS

3X1mL+1X5mL

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.常温阴凉避光
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 33 | 欧洲Eur. ≥ 27 | 東京Tokyo ≥ 9 | 香港与北京 ≥ 16